滅菌辦法

滅菌法系指用恰當的物理或化學(xué)手法將物品中活的微生物殺滅或除掉，從而使物品殘存活微生物的概率降低**預期的無(wú)菌確保水平的辦法。本法適用于制劑、質(zhì)料、輔料及醫療器械等物品的滅菌。

無(wú)菌物品是指物品中不含任何活的微生物。關(guān)于任何一批滅菌物品而言，肯定無(wú)菌無(wú)法確保，也無(wú)法用實(shí)驗來(lái)證實(shí)。一批物品的無(wú)菌特性只能相對地經(jīng)過(guò)物品中活微生物的概率低**某個(gè)可接受的水平來(lái)表述，即無(wú)菌確保水平(Sterility assurance level，簡(jiǎn)稱(chēng)SAL)。實(shí)踐出產(chǎn)進(jìn)程中，滅菌是指將物品中污染微生物的概率降低**預期的無(wú)菌確保水平。終究滅菌的物品微生物存活概率，即無(wú)菌確保水平不得高于10－6。已滅菌物品到達的無(wú)菌確保水平可經(jīng)過(guò)驗證斷定。
滅菌物品的無(wú)菌確保不能依賴(lài)于終究商品的無(wú)菌查驗，而是取決于出產(chǎn)進(jìn)程中選用合格的滅菌技能、嚴厲的GMP管理和良好的無(wú)菌確保體系。滅菌技能的斷定應綜合思考被滅菌物品的性質(zhì)、滅菌辦法的有用性和經(jīng)濟性、滅菌后物品的完整性和安穩性等要素。
滅菌程序的驗證是無(wú)菌確保的必要條件。滅菌程序經(jīng)驗證后，方可交付正式運用。驗證內容包括：
(1)編撰驗證計劃及擬定評價(jià)規范。
(2)承認滅菌設備技能資料齊全、裝置正確，并能處于正常運轉(裝置承認)。
(3)承認滅菌設備、要害操控和記載體系能在規則的參數范圍內正常運轉(運轉承認)。
(4)選用被滅菌物品或模仿物品按預訂滅菌程序進(jìn)行重復實(shí)驗，承認各要害技能與參數契合預訂規范，斷定經(jīng)滅菌物品的無(wú)菌確保水平契合規則(性能承認)。
(5)匯總并完善各種文件和汜錄，編撰驗證陳述。
平時(shí)出產(chǎn)中，應對滅菌程序的運轉狀況進(jìn)行監控，承認要害參數(如溫度、壓力、時(shí)刻、濕度、滅菌氣體濃度及吸收的輻照劑量等)均在驗證斷定的范圍內。滅菌程序應定時(shí)進(jìn)行再驗證。當滅菌設備或程序發(fā)作改動(dòng)(包括滅菌物品裝載辦法和數量的改動(dòng))時(shí)，應進(jìn)行再驗證。
物品的無(wú)菌確保與滅菌技能、滅菌前物品被污染的程度及污染菌的特性有關(guān)。因而，應根據滅菌技能的特色擬定滅菌物品滅菌前的微生物污染水平及污染菌的耐受極限并進(jìn)行監控，并在出產(chǎn)的各個(gè)環(huán)節采納各種辦法降低污染，確保微生物污染操控在規則的極限內。
滅菌的冷卻期間。應采納辦法避免已滅菌物品被再次污染。任何狀況下，都應請求容器及其密封體系確保物品在有用期內契合無(wú)菌請求。
滅菌辦法
常用的滅菌辦法有濕熱滅菌法、干熱滅菌法、輻射滅菌法、氣體滅菌法和過(guò)濾除菌法?？筛鶕粶缇锲返奶匦赃x用一種或多種辦法組合滅菌。只需物品答應，應盡也許選用終究滅菌法滅菌。若物品不適合選用終究滅菌法，可選用過(guò)濾除菌法或無(wú)菌出產(chǎn)技能到達無(wú)菌確保請求，只需也許，應對非終究滅菌的物品作彌補性滅菌處理(如流轉蒸汽滅菌)。
一、濕熱滅菌法
本法系指將物品置于滅菌柜內運用高壓飽滿(mǎn)蒸汽，過(guò)熱水噴淋等手法使微生物菌體中的蛋白質(zhì)、核酸發(fā)作變性而殺滅微生物的辦法。該法滅菌能力強．為熱力滅菌中**有用、運用**廣泛的滅菌辦法。藥品、容器、培育基、無(wú)菌衣、膠塞以及別的遇高溫文濕潤不發(fā)作變化或損壞的物品。均可選用本法滅菌。流轉蒸汽不能徹底殺滅細菌孢子，通?？勺鳛椴荒蜔釤o(wú)菌商品的輔佐滅菌手法。
濕熱滅菌條件的挑選應思考滅菌物品的熱安穩性、熱穿透力、微生物污染程度等要素。濕熱滅菌條件通常選用121℃×15min、121℃×30min或116℃×40min的程序，也可選用別的溫度和時(shí)刻參數，但不管選用何種滅菌溫度和時(shí)刻參數，都有必要證實(shí)所選用的滅菌技能和監控辦法在正常運轉進(jìn)程中能確保物品滅菌后的SAL≤10－6。當滅菌程序的選定選用F0值概念時(shí)(F0值為規范滅菌時(shí)刻，系滅菌進(jìn)程賦予被滅菌物品121℃下的滅菌時(shí)刻)，應采納格外辦法確保被滅菌物品能得到滿(mǎn)足的無(wú)菌確保，此刻，除對滅菌程序進(jìn)行驗證外，還有必要在出產(chǎn)進(jìn)程中對微生物進(jìn)行監控，證實(shí)污染的微生物目標低于設定的極限。對熱安穩的物品，滅菌技能可**過(guò)度殺滅法，以確保被滅菌物品取得滿(mǎn)足的無(wú)菌確保值。熱不安穩性物品，其滅菌技能的斷定依賴(lài)于在必定的時(shí)刻內，必定的出產(chǎn)批次的被滅菌物品滅菌前微生物污染的水平及其耐熱性。因而，平時(shí)出產(chǎn)全進(jìn)程應對商品中污染的微生物進(jìn)行接連地、嚴厲地監控．并采納各種辦法降低物品微生物污染水平，格外是避免耐熱菌的污染。熱不安穩性物品的F0值通常不低干8min。
選用濕熱滅菌器進(jìn)行濕熱滅菌時(shí)，被滅菌物品應有恰當的裝載辦法，不能擺放過(guò)密，以確保滅菌的有用性和均一性。
濕熱滅菌法應承認滅菌柜在不一樣裝載時(shí)也許存在的冷點(diǎn)。當用生物指示劑進(jìn)一步承認滅菌作用時(shí)，應將其置于冷點(diǎn)處。水法常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus)。
二、干熱滅菌法
本法系指將物品置于干熱滅菌柜、地道等滅菌器設備中，運用干熱空氣到達殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)的辦法。適用于耐高溫但不宜用濕熱滅菌法滅菌的物品滅菌，如玻璃用具、金屬制容器、纖維成品、固體試藥、液狀白臘等均可選用本法滅菌。
干熱火菌條件通常為160～170℃×120min以上、170～l80℃×60min以上或250℃×45min以上，也可選用別的溫度和時(shí)刻參數。不管選用何種滅菌條件，均應確保滅菌后的物品的SAL≤10－6。選用干熱過(guò)度殺滅后的物品通常無(wú)需進(jìn)行滅菌前污染微生物的測定。250℃×45min的干熱滅菌也可除掉無(wú)菌商品包裝容器及有關(guān)出產(chǎn)灌裝用具中的熱原物質(zhì)。#p#分頁(yè)標題#e#
采州干熱滅菌時(shí)，被滅菌物品應有恰當的裝載辦法，不能擺放過(guò)密，以確保滅菌的有用性和均一性。
干熱滅菌法應承認滅菌柜中的溫度散布契合設定的規范及斷定**冷點(diǎn)方位等。常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus subtilis)。細菌內毒素滅活驗證實(shí)驗是證實(shí)除熱原進(jìn)程有用性的實(shí)驗。通常將不小于1000單位的細菌內毒素參加待去熱原的物品中，證實(shí)該去熱原技能能使內毒素**少降低3個(gè)對數單位。細菌內毒素滅活驗證實(shí)驗所用的細菌內毒素通常為大腸埃希菌內毒素(Escherichia coliendoxin)。
三、輻射滅菌法
本法系指將物品置于適合放射源輻射的γ射線(xiàn)或適合的電子加速器發(fā)作的電子束中進(jìn)行電離輻射而到達殺滅微生物的辦法。本法**常用的為60Co-γ射線(xiàn)輻射滅菌。醫療器械、容器、出產(chǎn)輔佐用品、不受輻射損壞的質(zhì)料藥及成品等均可用本法滅菌。
選用輻射滅菌法滅菌的無(wú)菌物品其SAL應≤10－6。γ射線(xiàn)輻射滅菌所操控的參數主要是輻射劑量(指滅菌物品的吸收劑量)。泫劑量的擬定應思考滅菌物品的適應性及也許污染的微生物**大數量及**強抗輻射力，事先應驗證所運用的劑量不影響被滅菌物品的安全性、有用性及安穩性。常用的輻射滅菌吸收劑量為25kGy。對終究商品，質(zhì)料藥、某些醫療器件應盡也許選用低輻射劑量滅菌。滅菌前，應對被滅菌物品微生物污染的數量和抗輻射強度進(jìn)行測定，以評價(jià)滅菌進(jìn)程賦予該滅菌物品的無(wú)菌確保水平。關(guān)于已設定的劑量，應定時(shí)審閱，以驗證其有用性。
滅菌時(shí)，應選用恰當的化學(xué)或物理辦法對滅菌物品吸收的輻射劑量進(jìn)行監控。以充沛證實(shí)滅菌物品吸收的劑量是在規則的極限內。如選用與滅菌物品一同被輻射的放射性劑量計，劑量計要置于規則的部位。在初裝置時(shí)劑量計運用規范源進(jìn)行校對，并定時(shí)進(jìn)行再校對。
60Co-γ射線(xiàn)輻射滅菌法常用的生物指示劑為矮小芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus pumilus)。
四、氣體滅菌法
本法系指用化學(xué)消毒劑構成的氣體殺滅微生物的辦法。常用的化學(xué)消毒劑有環(huán)氧乙烷、氣態(tài)過(guò)氧化氫、甲醛、臭氧(O3)等，本法適用于在氣體中安穩的物品滅菌。選用氣體滅菌法時(shí)，應注意滅菌氣體的可燃可爆性、致畸性和殘留毒性。
本法中**常用的氣體是環(huán)氧乙烷，通常與80％～90％的慵懶氣體混合運用，在充有滅菌氣體的高壓腔室內進(jìn)行。該法可用于醫療器械，塑料成品等不能選用高溫滅菌的物品滅菌。含氯的物品及能吸附環(huán)氧乙烷的物品則不宜運用本法滅菌。
選用環(huán)氧乙烷滅菌時(shí)，滅菌柜內的溫度、濕度、滅菌氣體濃度、滅菌時(shí)刻是影響滅菌作用的主要因數?？蛇x用下列滅菌條件：
    溫度              54℃±10℃
    相對濕度          60％±10％
    滅菌壓力          8×105Pa
    滅菌時(shí)刻          90min
滅菌條件應予驗證。滅菌時(shí)，將滅菌腔室抽成真空，然后通入蒸汽使腔室內到達設定的溫濕度平衡的額定值，再通入經(jīng)過(guò)濾和預熱的環(huán)氧乙烷氣體。滅菌進(jìn)程中，應緊密監控腔室的溫度、濕度、壓力、環(huán)氧乙烷濃度及滅菌時(shí)刻。必要時(shí)運用生物指示劑監控滅菌作用。本法滅菌程序的操控具有必定難度，整個(gè)滅菌進(jìn)程應在技能嫻熟人員的監督下進(jìn)行。滅菌后，應采納新鮮空氣置換，使殘留環(huán)氧乙烷和別的易揮發(fā)性殘留物散失。并對滅菌物品中的環(huán)氧乙烷殘留物和反響商品進(jìn)行監控，以證實(shí)其不超越規則的濃度，避免發(fā)生毒性。    ·
選用環(huán)氧乙烷滅菌時(shí)，應進(jìn)行泄漏實(shí)驗，以承認滅菌腔室的密閉性。滅菌程序承認時(shí)，還應思考物品包裝資料和滅菌腔室巾物品的擺放辦法對滅菌氣體的分散和浸透的影響。生物指示劑通常選用枯草芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus subtilis)。
五、過(guò)濾除菌法
本法系運用細菌不能經(jīng)過(guò)細密具孔濾材的原理以除掉氣體或液體中微生物的辦法。常用于氣體、熱不安穩的藥品溶液或質(zhì)料的除菌。
除菌過(guò)濾器選用于孔徑散布均勻的微孔濾膜作過(guò)濾資料，微孔濾膜分親水性和疏水性?xún)煞N。濾膜原料依過(guò)濾物品的性質(zhì)及過(guò)濾意圖而定。約品牛產(chǎn)十選用的除菌濾膜孔徑通常不超越0.22μm。過(guò)濾器的孔徑界說(shuō)來(lái)自過(guò)濾器對微生物的截留，而非均勻孔徑的散布系數。所以，用于終究除菌的過(guò)濾器有必要挑選具有截流實(shí)驗證實(shí)的除菌級過(guò)濾器。過(guò)濾器對濾液的吸附不得影響藥品質(zhì)量，不得有纖維掉落，禁用含石棉的過(guò)濾器。過(guò)濾器的運用者應了解濾液過(guò)濾進(jìn)程中的分出物性質(zhì)、數量并評價(jià)其毒性影響。濾器和濾膜在運用前應進(jìn)行潔凈處理，并用高壓蒸汽進(jìn)行滅菌或作在線(xiàn)滅菌。替換種類(lèi)和批次應先清洗濾器，再替換濾芯或濾膜或直接替換濾器。
過(guò)濾進(jìn)程中無(wú)菌確保與過(guò)濾液體的初始生物負荷及過(guò)濾器的對數降低值LRV(log reduction value)有關(guān)。LRV系指規則條件下．被過(guò)濾液體過(guò)濾前的微生物數量與過(guò)濾后的微生物數量比的常用對數值。
即：    LRV=lgN0－lgN
式中   N0為商品除菌前的微生物數量。
       N為商品除菌后的微生物數量。#p#分頁(yè)標題#e#
LRV用于表明過(guò)濾器的過(guò)濾除菌功率，對孔徑為0.22μm的過(guò)濾器而言，請求每1cm2有用過(guò)濾面積的LRV應不小于7。因而過(guò)濾除菌時(shí)，被過(guò)濾商品總的污染量應控  制在規則的極限內。為確保過(guò)濾除菌作用，可運用兩個(gè)除菌級的過(guò)濾器串連過(guò)濾，或在灌裝前用過(guò)濾器進(jìn)行再次過(guò)濾。
在過(guò)濾除菌中，通常無(wú)法對全進(jìn)程中過(guò)濾器的要害參數(濾膜孔徑的巨細及散布，濾膜的完整性及LRV)進(jìn)行監控。因而，在每一次過(guò)濾除菌前后均應作濾器的完整性實(shí)驗，即氣泡點(diǎn)實(shí)驗或壓力保持實(shí)驗或氣體分散流量實(shí)驗，承認濾膜在除菌過(guò)濾進(jìn)程中的有用性和完整性。完整性的測驗規范來(lái)自于有關(guān)細菌載留實(shí)驗數據。除菌過(guò)濾器的運用時(shí)刻應進(jìn)行驗證，通常不該超越一個(gè)工作日，否則應進(jìn)行驗證。
過(guò)濾除菌法常用的生物指示劑為缺點(diǎn)假單胞菌(Pseudomonas diminuta)。
經(jīng)過(guò)過(guò)濾除菌法到達無(wú)菌的商品應緊密臨控其出產(chǎn)環(huán)境的潔凈度，應在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行過(guò)濾操作。有關(guān)的設備、包裝容器、塞子及別的物品應選用恰當的辦法進(jìn)行滅菌，并避免再污染。
六、無(wú)菌出產(chǎn)技能
無(wú)菌出產(chǎn)技能系指有必要在無(wú)菌操控條件下出產(chǎn)無(wú)菌制劑的辦法，無(wú)菌分裝及無(wú)菌凍干是**常見(jiàn)的無(wú)菌出產(chǎn)技能。后者在技能進(jìn)程中須選用過(guò)濾除菌法。
無(wú)菌出產(chǎn)技能應緊密監控其出產(chǎn)環(huán)境的潔凈度，并應在無(wú)菌操控的環(huán)境下進(jìn)行過(guò)濾操作。有關(guān)的設備、包裝容器、塞子及別的物品應選用恰當的辦法進(jìn)行滅菌。并避免被再次污染。
無(wú)菌出產(chǎn)技能進(jìn)程的無(wú)菌確保應經(jīng)過(guò)培育基無(wú)菌灌裝模仿實(shí)驗驗證。在出產(chǎn)進(jìn)程中，應緊密監控出產(chǎn)環(huán)境的無(wú)菌空氣質(zhì)量、操作人員的本質(zhì)、各物品的無(wú)菌性。
無(wú)菌出產(chǎn)技能應定時(shí)進(jìn)行驗證．包括對環(huán)境空氣過(guò)濾體系有用性驗證及培育基模仿灌裝實(shí)驗。
生物指示劑
生物指示劑系一類(lèi)特別的活微生物成品，可用于承認滅菌設備的性能、滅菌程序的驗證、出產(chǎn)進(jìn)程滅菌作用的監控等。用于滅菌驗證中的生物指示劑通常是細菌的孢子。
1．制備生物指示劑用微生物的基本請求
不一樣的滅菌辦法運用不一樣的生物指示劑，制備生物指示劑所選用的微生物有必要具有以下特性：
(1)菌種的耐受性應大于需滅菌商品中所有也許污染菌的耐受性。
(2)菌種應無(wú)致病性。
(3)菌株應安穩。存活期長(cháng)，易于保存。
(4)易于培育。若運用休眠孢子，生物指示劑中休眠孢子含量要在90％以上。
2．生物指示劑的制備
生物指示劑的制備應按必定的程序進(jìn)行，制備前，需先斷定所用微生物的特性，如D值(微生物的耐熱參數，系指必定溫度下，將微生物殺滅90％所需的時(shí)刻，以分鐘表明)等。菌株運用適官的培育基進(jìn)行培育。培育物應制成懸浮液，其間孢子的數量應占優(yōu)勢，孢子應懸浮于無(wú)養分的液體中保存。
生物指示劑中包括必定數量的一種或多種孢子?？芍瞥啥喾N方式。通常是將必定數量的孢子附著(zhù)在慵懶的載體上，如濾紙條、玻片、不銹鋼、塑料成品等：孢子懸浮液也可密封于安瓿中；有的生物指示劑還配有培育基體系。D值除與滅菌條件有關(guān)外，還與微生物存在的環(huán)境有關(guān)。因而，必定方式的生物指示劑制備完成后，應測定D值和孢子總數。生物指示劑應選用適宜的資料包裝，并設定有用期。載體和包裝資料在維護生物指示劑不致污染的一起，還應確保滅菌劑穿透并能與生物指示劑充沛觸摸。載體和包裝的規劃·原則是便于儲存、運送、取樣、搬運接種。
有些生物指示劑可直接將孢子接種**液體滅菌物或具有與其類(lèi)似的物理和化學(xué)特性的替代品中。運用替代品時(shí)，運用數據證實(shí)二者的等效性。
3．生物指示劑的運用
在滅菌程序的驗證中，雖然可經(jīng)過(guò)滅菌進(jìn)程某些參數的監控來(lái)評價(jià)滅菌作用，但生物指示劑的被殺滅程度，則是評價(jià)一個(gè)滅菌程序有用性**直觀(guān)的目標?？蛇\用市售的標    準生物指示劑，也可運用由平時(shí)出產(chǎn)污染菌監控中別離耐受性**強的微生物制備的孢子。在生物指示劑驗證實(shí)驗中，需斷定孢子在實(shí)踐滅菌條件下的D值，并測定孢子的純度和數量。驗證時(shí)，生物指示劑的微生物用量應比平時(shí)檢出的微生物污染量大，耐受性強，以確保滅菌程序有更大的安全性。在終究滅菌法中，生物指示劑應聽(tīng)任滅菌柜的不一樣部位。并避免指示劑直接觸摸到被滅菌物品。生物指示劑按設定的條件滅菌后取出，分別置培育基中培育，斷定生物指示劑中的孢子是否被徹底殺滅。
過(guò)度殺滅商品滅菌驗證通常不思考微生物污染水平，可選用市售的生物指示劑。對滅菌手法耐受性差的商品，規劃滅菌程序時(shí)，根據經(jīng)驗預計在該出產(chǎn)技能中商品微生物污染的水平，挑選生物指示劑的菌種和孢子數量。這類(lèi)商品的無(wú)菌確保應經(jīng)過(guò)監控每批滅菌前的微生物污染的數量、耐受性和滅菌程序驗證所取得的數據進(jìn)行評價(jià)。
4．常用生物指示劑
(1)濕熱滅菌法 濕熱滅菌法**常用的牛物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus stearothermophilus，如NCTC 10007、NCIMB 8157、ATCC 7953)。D值為1.5～  3.0min，每片(或每瓶)活孢子數5×105～5×106個(gè)，在121℃、19min下應被徹底殺滅。此外，還可運用生孢梭菌孢子(Spores of Clostridium sporogenes，如NCTC 8594、NCIMB 8053、ATCC 7955)，D值為0.4～0.8min。
(2)干熱滅菌法  干熱滅菌法**常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌抱子(Spores of Bacillus subtilis，如NCIMB 8058、ATCC 9372)。D值大于1.5min，每片活孢子數5×105～5×106個(gè)。去熱原驗證時(shí)運用大腸埃希菌內毒素(Escherichia coliendomn)，加量不小于1000細菌內毒索單位。#p#分頁(yè)標題#e#
(3)輻射滅菌法  輻射滅菌法**常用的生物指示劑為矮小芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus pumilus，如NCTC 10327、NCIMB 10692、ATCC 27142)。每片活抱子數107～108，置于放射劑量25kGy條件下，D值約3kGy。但應注意滅菌物品中所負載的微生物也許比矮小芽孢桿菌孢子顯現更強的抗輻射力。因而矮小芽孢桿菌孢子可用于監控滅菌進(jìn)程，但不能用于滅菌輻射劑量樹(shù)立的根據。
(4)氣體滅菌法  環(huán)氧乙烷滅菌**常用的生物指示劑為枯草芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus subtilis，如NCTC 10073、ATCC 9372)。氣態(tài)過(guò)氧化氫滅菌**常用的生物指示劑為嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子(Spores of Bacillus steatothermophilus，如NCTC 10007、NCIMB 8157、ATCC 7953)。每片活孢子數1×106～5×106個(gè)。環(huán)氧乙烷滅菌中，枯草芽孢桿菌孢子D值大于2.5min，在環(huán)氧乙烷濃度為600mg／L，相對濕度為60％，溫度為54℃下滅菌，60min應被殺滅。
(5)過(guò)濾除菌法  過(guò)濾除菌法**常用的生物指示劑為缺點(diǎn)假單胞菌(Pseudomonas diminuta，如ATCC 19146)，用于濾膜孔徑為0.22μm的濾器；黏質(zhì)沙雷菌(Serratia  marcescens)(ATCC 1 4756)用于濾膜孔徑為0.45μm的濾器。