1.0目的
制定使用歧管的膜過(guò)濾法對樣品進(jìn)行無(wú)菌測試的程序。
2.0范圍
適用于質(zhì)量控制微生物實(shí)驗室中稀釋研究和穩定性研究樣品的無(wú)菌測試。
3.0責任
受過(guò)訓練的質(zhì)量控制/微生物學(xué)
4.0問(wèn)責制
部門(mén)主管
5.0程序
5.1一般說(shuō)明和注意事項
5.1.1按照SOP進(jìn)入和退出微生物檢測和無(wú)菌檢測區域。
5.1.2確保所有無(wú)菌或無(wú)菌物品在日期之前有效/未過(guò)期，并且包裝袋是完整的。如果發(fā)現任何包裝損壞或完整性受損，請不要使用此類(lèi)材料。
5.1.3確保要使用的所有培養基和稀釋劑均已預先孵育。檢查介質(zhì)是否受到污染或物理?yè)p壞。對于液體硫代乙醇酸酯培養基，如果超過(guò)三分之一的培養基已獲得粉紅色（刃天青環(huán)），則請勿使用此類(lèi)培養基容器。
5.1.4檢查物理參數（溫度，濕度和壓差）），并在開(kāi)始活動(dòng)前確保它們在限制范圍內。
5.1.5在每次無(wú)菌測試期間，應按照SOP 進(jìn)行環(huán)境監測。
5.2將材料轉移到無(wú)菌測試區和cRABS
5.2.1進(jìn)行無(wú)菌測試所需的材料，如培養基，沖洗液或稀釋劑，測試附件即，鑷子，剪刀，帶有管道的春分排水盤(pán)，排水收集容器等，應在高壓
滅菌器中滅菌，卸載并儲存在無(wú)菌環(huán)境中一側（緩沖室）。
5.2.2所有其他材料應按以下方式轉移：
5.2.2.1將所有與無(wú)菌性測試有關(guān)的材料（例如樣品和其他無(wú)菌配件）保存在通向LAL測試室的培養箱中的通過(guò)箱中。
5.2.2.2從LAL室卸載物料并保存在LAF中。
5.2.2.3取下產(chǎn)品小瓶的翻轉密封，并使用過(guò)濾的消毒液對小瓶的外表面進(jìn)行消毒。
5.2.2.4使用過(guò)濾的消毒液消毒無(wú)菌附件包裝的外表面。
5.2.2.5將所有物料轉移到動(dòng)態(tài)通道箱開(kāi)口處至緩沖室。確保動(dòng)態(tài)通道盒處于開(kāi)啟狀態(tài)。
5.2.2.6從緩沖室卸下物料，然后轉移到無(wú)菌測試室。
5.2.3按照SOP
5.2.4 操作cRABS 5.2.4將所有必需的材料，如培養基容器，已消毒的配件（如歧管，過(guò)濾漏斗，鑷子，剪刀等），已過(guò)濾的消毒液和70％IPA和產(chǎn)品樣品送入無(wú)菌測試室。
5.2.5除產(chǎn)品樣品外，所有材料均應保存在cRABS檢驗箱中。
5.2.6關(guān)閉cRABS通行箱，并用已過(guò)濾的70％IPA擦拭材料的外表面。打開(kāi)紫外線(xiàn)燈，使材料暴露不少于15分鐘。
5.2.7至少15分鐘后，通過(guò)提供的通道將材料從cRABS通行箱轉移到cRABS。
5.2.8如果是樣品，請將其保存在cRABS 通行證箱中，關(guān)閉通行箱，并用過(guò)濾后的70％IPA擦拭樣品的外表面。不要打開(kāi)紫外線(xiàn)燈。讓消毒劑干燥。
5.2.9通過(guò)提供的通道將樣品從cRABS通行箱轉移到cRABS。
5.2.10試驗前，確保每件物品上的消毒劑均已正確干燥且包裝成一體。
5.2.11將排水收集容器牢固地連接到cRABS排水口。
5.3樣品要求
5.3.1容器數量：根據相應的規程
5.3.2待測樣品的體積
穩定性樣品：
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容器內容
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每種介質(zhì)要測試的zui小數量
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少于1毫升
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總含量
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1至40毫升
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內容物的一半但不少于1毫升
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大于40毫升但小于100毫升
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20毫升
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100毫升以上
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含量的10％，但不少于20 ml
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注意：如果填充量大于10 ml，則考慮從3個(gè)小瓶中剩下的樣品進(jìn)行細菌內毒素測試（在測試之前合并）
稀釋研究樣品：根據各自的方案，但不少于20 ml
5.4使用流形的開(kāi)放漏斗法進(jìn)行無(wú)菌測試
5.4.1將無(wú)菌歧管放置在cRABS內，并通過(guò)排水收集容器或燒瓶連接到真空泵。
5.4.2將無(wú)菌的膜過(guò)濾漏斗放在歧管的支架上。將無(wú)菌的0.45µ 膜過(guò)濾器放在過(guò)濾漏斗的過(guò)濾器支架上。
5.4.3打開(kāi)過(guò)濾組件的蓋子，并用100 ml沖洗液潤濕膜，然后打開(kāi)真空泵進(jìn)行過(guò)濾。
5.4.4無(wú)菌地打開(kāi)產(chǎn)品容器的密封并將每個(gè)產(chǎn)品容器的內容物轉移到過(guò)濾組件中?；蛘?，使用無(wú)菌注射器和針頭無(wú)菌取出內容物并轉移。如果是凍干產(chǎn)品，請先用所需體積的無(wú)菌稀釋劑重新配制樣品，然后再轉移內容物。
5.4.6打開(kāi)真空泵并過(guò)濾內容物。
5.4.7過(guò)濾樣品后，加入100 ml沖洗液并過(guò)濾。重復此過(guò)程，直到3 x 100 ml沖洗液通過(guò)膜過(guò)濾。
注意：如果與以上不同，應根據驗證更改沖洗液和沖洗液的體積。
5.4.8沖洗后，用無(wú)菌鑷子和剪刀將膜無(wú)菌切成兩半。將膜的一半轉移到100 ml大豆酪蛋白消化培養基中，另一部分轉移到100 ml硫代乙醇酸液體培養基試管中。
5.4.9在試管上貼上產(chǎn)品名稱(chēng)，批號/ AR號，介質(zhì)批號，日期和分析員姓名縮寫(xiě)。
5.5負面產(chǎn)品控制測試
5.5.1在每個(gè)無(wú)菌測試階段進(jìn)行一次陰性對照測試，以作為測試階段中培養基和稀釋液無(wú)菌性和條件的對照。
5.5.2通過(guò)以100毫升0.1％無(wú)菌蛋白water水為產(chǎn)品并在操作過(guò)程中進(jìn)行以下
zui大操作來(lái)進(jìn)行測試：5.5.2.1如果在測試過(guò)程中進(jìn)行的zui大操作是針對凍干產(chǎn)品，則所有步驟凍干產(chǎn)品測試中涉及的產(chǎn)品應進(jìn)行陰性產(chǎn)品控制。
5.5.2.2如果在測試期間對液體產(chǎn)品進(jìn)行的zui大操作，則應對液體產(chǎn)品中涉及的所有步驟進(jìn)行負面產(chǎn)品控制。
5.6物料的轉移和處置
5.6.1測試完成后，將所有附件，用過(guò)的樣品容器，空的介質(zhì)稀釋劑容器通過(guò)通道箱從緩沖室轉移到高壓滅菌室，轉移到高壓滅菌區。
5.6.2將培養罐和培養基管通過(guò)動(dòng)態(tài)傳遞箱從緩沖室轉移到LAL測試室，然后通過(guò)傳遞箱從LAL測試室傳遞到培養箱。
5.6.3用過(guò)濾的消毒劑清潔cRABS。通過(guò)將足夠量的消毒劑溶液通過(guò)端口和管道轉移，使所有表面都與消毒劑溶液接觸，從而對端口和管道進(jìn)行消毒以收集下水道。
5.6.4如果排水收集管關(guān)閉閥門(mén)，則斷開(kāi)不銹鋼打開(kāi)TC夾以打開(kāi)容器。通過(guò)緩沖室中的通過(guò)箱將容器轉移到高壓
滅菌器中。
5.6.5通過(guò)添加適當的去活劑去活容器中的溶液，并按照SOP進(jìn)行處置。
5.7孵化與觀(guān)察
5.7.1在22.5±2.5°C下孵育大豆酪蛋白消化培養基（SCM）無(wú)菌試管，在32.5±2.5°C下孵育液體硫代乙醇酸酯培養基（FTG）無(wú)菌試管14天。
5.7.2在每個(gè)工作日中，檢查在14天的溫育期內微生物生長(cháng)的跡象，并記錄結果。如果第14天是每周休息或放假，則在下一個(gè)工作日進(jìn)行觀(guān)察。
5.7.3在觀(guān)察過(guò)程中，任何渾濁，渾濁，沉淀，棉球類(lèi)型增長(cháng)，透明介質(zhì)（渦旋時(shí)底部從底部升起）的明顯增長(cháng)的證據，然后移開(kāi)此類(lèi)罐/管并按照SOP 進(jìn)行識別/調查。在這種觀(guān)察的那天。
5.7.4孵育結束后，請按照下列說(shuō)明處理培養基SOP處理媒體。
5.8驗收標準
5.8.1在培養期結束時(shí)，如果在任何無(wú)菌測試介質(zhì)中都沒(méi)有微生物生長(cháng)的跡象，則被測樣品/產(chǎn)品符合無(wú)菌要求。
5.8.2如果在任何一種介質(zhì)中均發(fā)現了微生物生長(cháng)的證據，則被測試的樣品/產(chǎn)品不符合無(wú)菌測試，除非可以清楚地證明該測試對與樣品/產(chǎn)品無(wú)關(guān)的原因無(wú)效經(jīng)過(guò)測試。僅當滿(mǎn)足以下一個(gè)或多個(gè)條件時(shí)，該試驗才被視為無(wú)效：
5.8.2.1對無(wú)菌試驗區進(jìn)行的微生物監測表明存在故障。
5.8.2.2對所涉及的測試過(guò)程中使用的測試程序進(jìn)行檢查可以發(fā)現故障。
5.8.2.3在陰性對照中發(fā)現微生物生長(cháng)。
5.8.2.4在確定從測試中分離出的微生物的身份之后，可以明確地將該物種（或這些物種）的生長(cháng)歸因于進(jìn)行無(wú)菌測試程序所用的材料和/或技術(shù)的缺陷。
5.8.5如果宣布測試無(wú)效，則必須以與原始測試相同的單位數重復進(jìn)行測試。
5.8.6如果在重復測試中沒(méi)有發(fā)現微生物生長(cháng)的跡象，則所檢查的產(chǎn)品符合無(wú)菌測試。
5.8.7如果在重復測試中發(fā)現微生物生長(cháng)，則所檢查的產(chǎn)品不符合無(wú)菌測試。
有關(guān)：真菌和細菌常用培養基的培養條件
6.0縮寫(xiě)
6.1 SOP-標準操作程序
6.2 cRAB-封閉式限制進(jìn)入障礙系統
6.3％-百分比
6.4 UV-紫外線(xiàn)
6.5°C-攝氏度
6.6 ml-毫升
6.7 SCA-大豆酪蛋白消化瓊脂
6.8 SCM-大豆酪蛋白消化培養基
