濕熱滅菌方法的一種。是微生物培養中**重要的滅菌方法。這種滅菌方法是基于水在煮沸時(shí)所形成的蒸汽不能擴散到外面去，而聚集在密封的容器中，在密閉的情況下，隨著(zhù)水的煮沸，蒸汽壓力升高，溫度也相應增高。高壓蒸汽是**有效的滅菌法，能迅速地達到完全徹底
滅菌。一般在15磅/英寸2
壓力下（121.6℃），15～30分鐘，所有微生物包括芽孢在內都可殺死。它適用于對一般培養基和玻璃器皿的滅菌。
進(jìn)行高壓蒸汽滅菌的容器是高壓
蒸汽滅菌鍋。高壓
蒸汽滅菌鍋是一個(gè)能耐壓又可以密閉的金屬鍋，有立式與臥式兩種。熱源可以用電熱、煤氣、蒸汽等。鍋上裝有壓力表，有的還裝有溫度計，能及時(shí)了解鍋內壓力及溫度。鍋上還設有排氣口，其作用是在密閉之前，利用蒸汽將鍋內的冷空氣排凈，另外還裝有安全活門(mén)，如果壓力超過(guò)一定限度，活門(mén)即可自動(dòng)打開(kāi)，放出過(guò)多的蒸汽。
高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點(diǎn)不斷提高，從而鍋內溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內溫度達121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽孢。
注意:完全排除鍋內空氣，使鍋內全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排凈空氣，使鍋內均勻升溫，保證滅菌徹底。常用方法是：關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到0.05MPa時(shí)，打開(kāi)放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。關(guān)閥再通電后，壓力表上升達到0.1MPa時(shí),開(kāi)始計時(shí)，維持壓力0.1～0.15MPa 20分鐘。
到達保壓時(shí)間后，即可切斷電源，在壓力降到0.5MPa，可緩慢放出蒸氣，應注意不要使壓力降低太快，以致引起激烈的減壓沸騰，使容器中的液體四溢。當壓力降到零后，才能開(kāi)蓋，取出培養基，擺在平臺上，以待冷凝。不可久不放氣，引起培養基成分變化，以**培養基無(wú)法擺斜面 。一旦放置過(guò)久，由于鍋爐內有負壓，蓋子打不開(kāi)，只要將放氣閥打開(kāi)，大氣壓入，內外壓力平衡，蓋子便易打開(kāi)了。
對高壓滅菌后不變質(zhì)的物品，如無(wú)菌水、栽培介質(zhì)、接種用具，可以延長(cháng)滅菌時(shí)間或提高壓力。而培養基要嚴格遵守保壓時(shí)間，既要保壓徹底，又要防止培養基中的成分變質(zhì)或效力降低，不能隨意延長(cháng)時(shí)間
(1)準備。將
滅菌鍋放在2000瓦電爐上，或放在有足夠火力的煤氣灶、煤爐上，向鍋內加水**水位標記線(xiàn)為止。將準備滅菌的培養基及空玻璃器皿用牛皮紙包好，裝入鍋內套層中，物品放置不宜過(guò)多，過(guò)擠，鍋內應留出三分之一空間。然后蓋嚴鍋蓋，采用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋，關(guān)閉鍋蓋上的氣閥。
(2)加熱。點(diǎn)燃熱源，開(kāi)始加熱。當鍋蓋上的壓力表達到0.5千克/厘米2
時(shí)，打開(kāi)放氣閥，排凈鍋內冷空氣，直到壓力表回降到“0”時(shí)，關(guān)閉氣閥，繼續加熱。當壓力表上升到所需壓力時(shí)（一般為1千克/厘米2
），開(kāi)始計算滅菌時(shí)間。此時(shí)應適當關(guān)小熱源，不斷調節熱源大小，使壓力始終維持在所需數值上，達到保壓時(shí)間后，停止加熱，使
滅菌鍋內壓力自然下降。(3)結束。待壓力表降**“0”時(shí)，擰松螺旋，半開(kāi)鍋蓋，用鍋內余熱烘干蓋紙，10分鐘后取出滅菌物品。
(4)注意事項。在滅菌過(guò)程中，應注意排凈鍋內冷空氣，鍋內冷空氣如排放不凈，會(huì )影響滅菌效果，達不到徹底滅菌的目的。由于高壓蒸汽滅菌時(shí)，要使用溫度高達120℃、兩個(gè)大氣壓的過(guò)熱蒸汽，操作時(shí)，必須嚴格按照操作規程操作，否則容易發(fā)生意外事故。
采用的方法是高壓蒸氣滅菌。要求在滅菌過(guò)程中排出鍋內的冷空氣，這是為什么呢? 高壓蒸氣滅菌的原理，是利用一定壓力提高水的沸點(diǎn)，使溫度超過(guò)100℃ ，形成高壓高溫水蒸汽，迅速穿透細菌細胞壁而使細菌的蛋白質(zhì)變性以達到滅菌的目的。在使用高壓蒸氣滅菌時(shí)，
滅菌鍋內的冷空氣的排出是否完全，極為重要，因為空氣的膨脹壓大于水蒸氣的膨脹壓，所以當水蒸氣中含有空氣時(shí)，含空氣蒸氣的溫度低于飽和水蒸氣的溫度。滅菌鍋內留有不同分量空氣時(shí)，壓力與溫度的關(guān)系如下表1。
表1 滅菌鍋內留有不同分量空氣時(shí)，壓力與溫度的關(guān)系
